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2015无细胞蛋白表达系统(RTS)讲座-北大站
发布时间:2015-07-07        浏览次数:291        返回列表


RTS—一种高效的无细胞蛋白表达系统
源自德国
北京中生柏奥生物科技有限公司(www.ebaiao.com)推出一系列高效的无细胞蛋白表达试剂盒——RTS(Rapid Translation System),可实现真核蛋白、原核蛋白、二硫键蛋白、Fab抗体片段、膜蛋白等各类蛋白的高效表达,反应体系分为小、中、大三种规格,最高可实现24小时内50mg蛋白表达。
一、无细胞蛋白表达系统的原理
无细胞蛋白表达利用大肠杆菌、麦胚或昆虫的细胞裂解物作为基本反应系统,去除裂解物中的核酸和蛋白,保留蛋白合成所必需的核糖体和酶系统等,进行目标蛋白的合成。PCR产物、质粒载体和mRNA都可以做为反应模板。
反应体系可以是间歇式(batch)反应,在这种体系中,当反应进行4个小时左右时,由于底物的消耗和副产物的增多,反应受到抑制,因此间歇式反应时间一般为2-6小时。另外一种为CECF(Continuous Exchange Cell Free)体系,通过半透膜将反应体系分为反应室和供应室。反应底物和能量可以通过半透膜从供应室源源不断地向反应室提供,而反应产生的副产物通过半透膜扩散到供应室,保证了反应的长时间进行。这种CECF反应体系可以将反应时间延长到24小时,因此具有更高的产率(图1)。
图1 RTS无细胞蛋白表达系统示意图
二、RTS无细胞蛋白表达系统的优势
RTS无细胞蛋白表达系统通过对缓冲液系统和能量供应系统的优化,有效提高了蛋白合成的产率,称为高产HY(High Yield)系统。HY系统与CECF系统相结合,使RTS无细胞体外蛋白表达拥有无与伦比的优势:
1,高产量:大肠杆菌500CECF系统1ml反应体系蛋白产量高达6mg;
2,省时:体外表达系统在2-6小时(batch系统)或24小时(CECF系统)可完成蛋白合成反应;
3,高通量:体外蛋白合成系统可实现高通量蛋白合成;
4,方便:可根据目标蛋白性质在反应体系中加入分子伴侣、去污剂及一些辅助因子,提高蛋白的溶解性和活性;
5,自由:可根据实验需要,掺入荧光标记氨基酸、非天然氨基酸等;
6,广泛:适用于毒蛋白的合成。
三、RTS 产品介绍
RTS无细胞体外蛋白合成试剂盒包含有原核表达系统如大肠杆菌系统及真核表达系统如麦胚系统和昆虫系统等几类。试剂盒总体介绍如下表1:
表1 RTS体外无细胞蛋白表达试剂盒总览
四、如何选择RTS试剂盒
1,首次做蛋白表达
• RTS 100 E.coli H.Y.
2,蛋白的溶解性和活性有问题
• RTS 100 E.coli H.Y.试做
•用GroE, DnaK或其他因子进行优化;
•使用RTS 100 Wheat Germ真核蛋白表达系统
3,需要表达有二硫键的活性蛋白
•RTS 100 Disulfide Kits
4,需要筛选Fab抗体片段
•RTS 100 E. coli Fab Kit
5,需要表达毫克级活性蛋白
•首先使用RTS 100优化条件
•RTS 500 PM E.coli H.Y., RTS 500 E.coli Disulfide or RTS 500 Wheat germ扩大规模
•利用 RTS 9000 E.coli H.Y获得超过 10mg 规模
6,需要获得膜蛋白或翻译后修饰蛋白
•RTS 100 Insect Membrane Kit
7,需要获得有二硫键的膜蛋白和翻译后修饰蛋白
•RTS 100 Insect Disulfide Kit